用流式细胞光度术研究智能功对肝癌细胞DNA合成及细胞周期的影响

中　 国医学科学院基础医学研究所 　李梅　 张世馥　 吴洪

　 　 　 北京智能气功分会东单公园辅导站　 刘家洪　 李逢春    

　 　摘　 要 　 用流式细胞仪对人肝癌细胞(BEL—7402）进行DN1  1合成及细胞周期分析;结果证明实验组细胞 生长受抑制·细胞阻滞堆积于DNA合成前期(G上期)，使细胞不能进人DNA合成期(S期)，从而干扰DNA复制。 
　　关键词　　智能气功　　流式细胞光度术(FCM) 　DNA合成 　细胞周期 

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 前言   

　　我们曾实验证明智能功能抑制动物移值性肿瘤的生长及体外培 养癌细胞的增殖。但其机理如何，尚需探索门本文用流式细胞光度术研究分析智能功对肝癌DNA合成及细胞周期的影响以初步探索其抑瘤机理。

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　材料与方法 

　 　 一、细胞培养 
　 　 实验所用癌细胞，乃上海细胞生物所陈瑞铭等建立的人体肝癌 细胞系(BEL-7402)、为上皮样恶性细胞。我们将细胞培养J几含 15%小牛血清的RPMI 1640培养基内。设实验组与对照组,分置于两个孵箱内培养。实验组由气功师发气，每次3一5分钟对照组不作 处理。实验重复3次。 
　 　 二、DNA荧光染色和F CM检测 
　 　 按此项检测的特殊技术要求制作癌细胞标本。经RNA酶消化碘化丙(ProPidium Iodide.PI)荧光染色，应用FACS·120荧光激活细胞分选仪(Becton—Dicknson公司产品)，以每秒测量1000个细胞的速度，测出单个细胞的}l荧光强度，每个样品至少测量10000 个细胞。激光光源有“瓦氢离子激光器，波长为488mm，PI荧光通过 585nm阻断滤片，由光电倍增管检测，多道脉冲分析器分析，显示细 胞DNA的散点图和组方图，所得数据输入计算机，按FAC 420软件多正态拟合程序进行曲线拟合分析，计算出DN八含量·得出细胞 周期(G1、S5、G2+M )的百分比和G1的cv%(变异系数)。 

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 结果  

 　 　 (一)FCM枪测所得数据说明:对照组的癌细胞处于增殖迅速的状态,DNA合成期(S期)的细胞数较高。三次实验分别为61%,64%及39%。实验组周期是35%、40%与27%。DNA合成前期(G1i期)的细胞数，实验组却高于对照的Gl期2一3倍，实验为35%、40%、48%。对照组只有10%,19%与18%，提示实验组癌细胞经外气作用之后，细胞生长受到了抑制。因而多数的细胞被阻滞。堆积于G1期， 使细胞不能顺利地向S期进行，从而干扰了DNA的复制。 
　 　 (二)我们还同时研究了外气对BFL—7402细胞生长曲线的影 响，结果表明实验组细胞的增殖受到明显抑制，重复两次试验，结果 类似。与FCM检测结果一致。 

　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 讨论 

　 　 我们知道细胞周期分为四个期:①从有丝分裂完成到DNA复 制之前的这段间隙时间，称为G1期;②DNA复制的同时，即S期， DNA在S期含量增加一倍;③从DNA复制完成到有丝分裂开始· 这段时间称 G2期;①从细胞分裂开始到结束为M期。以往分析细 胞周期，多用生物化学方法测定细胞群体中I的平均含量·用3H一胸腺陡核昔掺人的自显影方法测定细胞周期的参数，或用静 态细胞光度计，测定大量细胞T}含量后，作出DNA含量分布的 组方图，进行细胞周期分析，这些方法不但费时费力，而且常达不到 统计学的精确度。 
　　FCM是现代国际较新技术，它能快速、准确地测出每个细胞的DNA含量，计算出细胞增殖周期的移行变化。从我们的实验结果证明外气引起BEL—7402肝癌细胞在Gl期积聚，从而阻滞细胞不能 顺利进人S期，即DNA合成期，此期进行DNA遗传物质的复制，由 于外气的于扰，DNA合成受到影响与阻断，此乃外气抑瘤机制之一。 
　 　 虽然实验是初步的，但为智能功抑瘤机制提供了一定的理论依据。 
　 注:　 李梅　 研究员　 张世馥　 副研究员 　 刘家洪　 教授

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2012-09-16